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借力斑马鱼技术 推动化妆品检测

发布日期: 2023.03.15

斑马鱼基因组与人类基因组同源度高达87%,能有效预测人类生理、病理、发育和代谢过程。其皮肤结构和功能与人类有极强对应性,可高度模拟化妆品在人体皮肤的生理反应机制。863检测深度挖掘斑马鱼优良生理特性,紧跟国际趋势,组建了强大的硕博团队,开辟了斑马鱼在化妆品功效/毒理领域内的诸多检测方法,为客户提供全面优质化妆品原料、配方和成品的开发测评服务。

服务板块

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01.原料洞察:案例:小球藻28种不同酵分经斑马鱼舒缓功效初筛,发现5种酵分具有潜在化妆品舒缓功效原料开发价值。

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02.配方甄选:案例:以抗坏血酸为抗氧化成分的配方随着某一银耳多糖含量的提高而出现抗氧化能力的下降。

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03.功效/毒理评测:案例:斑马鱼美白功效测评的客制化报告形式助力客户产品的市场宣传。


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04.品牌助推:凡经我司检测评价的优质化妆品将列入“863检测”的甄选品牌,通过公司自媒体账号或直播课程助其推广。


斑马鱼—化妆品检测加速器

斑马鱼,常见热带淡水鱼,成体长4~6 cm,作为继大小鼠后的第三大模式生物,斑马鱼在实验动物领域的应用中体现诸多优势:雌性斑马鱼每次可产卵200枚左右,是目前唯一适于微孔板高通量筛选、检测的脊椎动物;斑马鱼胚胎及幼鱼通体透明,检测结果直观易懂;斑马鱼个体差异小,测试结果重复性较高;其胚胎在24h内发育成形,可直接水中给药,经皮吸收,通常3天内出检测结果,相对兔、鼠、人体等试验,检测周期短成本低;根据《欧盟动物保护法》,使用斑马鱼代替哺乳动物符合实验动物保护“3R原则”。


功效测试

特殊功效宣称

测试项目

测试通路

祛斑美白

初筛/宣传

黑色素抑制试验

黑色素抑制率测定

祛痘

初筛/宣传

中性粒细胞迁移抑制试验

SLS诱导模型

滋养

初筛/宣传

胶原蛋白表达促进测试

微循环促进测试

I型胶原蛋白含量测定

VEGFR-EGFP模型

修护

初筛/宣传

损伤修护试验

微循环促进测试

断尾模型

VEGFR-EGFP模型


普通功效宣称

测试项目

测试通路

抗皱

胶原蛋白表达促进测试

尾鳍面积皱缩率测试

抗氧化测试

微循环促进测试

抗肌肉萎缩

I型胶原蛋白含量测定

UVA/UVB模型

ROS清除率测定

VEGFR-EGFP模型

α-Klotho-KO模型

紧致

弹性蛋白eln1/eln2表达促进测试

eln1/eln2转录拷贝数测定

舒缓

中性粒细胞迁移抑制试验

抗过敏反应测试

抗刺痛测试

SLS诱导模型

类胰蛋白含量测定

仔鱼游程减少率测定

保湿

鱼尾鳍缩水抑制测试

AQP3/HAS表达促进测试

0.9%NaCl模型

AQP3/HAS转录拷贝数测定

温和无刺激

鱼胚温和刺激性的测定

胚胎活跃度测定

新功效

根据功效宣称需求制定检测方法


毒理测试

测试项目

测试标准

测试通路

胚胎/仔鱼毒性

OECD   236 OECD236 Fish Embryo Acute Toxicity (FET) Test

T/GDST   1-2021  斑马鱼胚胎急性毒性测试A法和B法

T/HPCIA   004-2021化妆品 急性毒性的测定 斑马鱼胚法

胚胎和卵黄囊期发育异常观察、活跃度记录、LC50、NOEC等。

光毒性

部分参考《化妆品安全技术规范》

LC50、NOEC等。

眼刺激性

实验室内部方法

眼损伤快速评价模型:鱼游程测试;虹膜宽度测试;眼部基因crb1、stx3表达量测定。

妊娠毒性

实验室内部方法

卵巢异常率、产卵数、产卵异常率等。

婴童毒性

实验室内部方法

儿童用药模拟:仔鱼发育异常观察;活跃度记录等。


案例分享

01美白功效评价

-测试原理:斑马鱼体内的色素形成相关基因在序列和调控机制上和人类高度相似。斑马鱼胚胎通体透明,方便显微镜下拍照,可应用图像处理软件定量读取黑色素含量水平。通过比较受试组和对照组鱼胚胎黑色素水平变化,计算黑色素抑制率以评受试物黑色素生成抑制功效。

-测试标准:T/SHRH 036-2021 化妆品黑色素抑制测试-斑马鱼胚胎测试方法

-主要参数:黑素抑制率

-测试结论:受试物组48h和72h的黑色素抑制率显著高于空白组,表明受试物具有美白功效。

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02保湿功效评价

-测试原理:斑马鱼幼鱼在0.9%NaCl溶液中会出现明显的脱水现象,导致鱼尾鳍面积显著缩小,而具有保湿效果的活性因子能有效抑制这种现象。利用斑马鱼这一特性建立保湿测试模型,通过计算受试化妆品作用下鱼尾鳍面积的恢复状况来评价其保湿效果。

-测试标准:实验室内部方法

-评价指标:鱼尾鳍面积恢复率

-测试结论:受试物组斑马鱼尾旗面积显著大于模型组,表明受试物具有保湿功效。

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03抗皱功效评价

-测试原理:斑马鱼皮肤结构与人体皮肤结构相似,以过量紫外线照射时,可导致皮肤中的胶原蛋白、弹性蛋白减少,表现为尾鳍皮肤皱缩。添加受试物后,通过测量紫外线照射后幼鱼尾鳍面积的变化,计算尾鳍皱缩抑制率可以分析受试物对斑马鱼尾鳍变形的保护程度,从而评价其抗皱功效。

-测试标准:T/ZHCA 014-2022化妆品抗皱功效评价 斑马鱼幼鱼尾鳍皱缩抑制率法

-评价指标:鱼尾鳍面积皱缩抑制率

-测试结论:受试物组的斑马鱼尾鳍面积显著高于模型组,表明受试物具有抗皱功效。

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04舒缓功效评价

-测试原理:十二烷基磺酸钠(SLS)能诱发表皮炎症细胞浸润,导致皮肤出现红斑、瘙痒、疼痛等症状。SLS暴露于斑马鱼皮肤表面,导致中性粒细胞发生炎症免疫应答,向皮肤表面增殖和迁移。使用转基因中性粒细胞绿色荧光品系斑马鱼进行实验,通过图像分析方法可对中性粒细胞进行计数。给药后与对照组相比,计算受试物对班马鱼中性粒细胞的抑制率,从而评价其舒缓功效。

-测试标准:T/ZHCA 016-2022 化妆品舒缓功效评价 斑马鱼幼鱼中性粒细胞抑制率法

-评价指标:鱼尾鳍面积皱缩抑制率

-测试结论:受试物组的斑马鱼中性粒细胞迁移数量显著低于模型组,表明受试物具有舒缓功效。

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05温和无刺激评价

-测试原理:使用24 孔细胞培养板,在空白对照或阳性对照控制对照的条件下,将24 hpf 的斑马鱼胚胎置于不同的样品中,在斑马鱼行为分析仪下测试(5 min内),根据视频内胚胎对受试样品的温和刺激性反应(胚胎位移)的平均次数,表征样品的温和刺激功效。

-测试标准:T/HPCIA 006-2021 化妆品 温和刺激性的测定 斑马鱼胚法

-评价指标:胚胎摆动次数

-测试结论:两受试物组的斑马鱼胚胎摆动脉冲数显著高于空白组且与受试浓度呈正相关,表明其无温和无刺激功效。

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